十大功劳属(Mahonia)植物在我国约有50种，分布于南方各地。该属植物主要以根、茎入药，称“刺黄连、刺黄柏、功劳木”等；有的地区以叶入药，称“功劳叶”〔1，2〕。有的用作提取“黄连素”、异汉防己甲素(isotetrandrine)的原料。已从该属植物中发现20多种苄基异喹啉类生物碱，其中双苄基异喹啉类的尖刺碱(oxyacanthine,Ⅰ)、小檗胺(berbamine,Ⅱ)、异汉防己甲素(Ⅴ)和原小檗碱类的小檗碱(berberine,Ⅶ)、药根碱(jatrorrhizine,Ⅳ)、巴马亭(palmatine,Ⅵ)、非洲防己胺(columbamine,Ⅲ)等成分分布广泛，含量较高。现代药理实验和临床应用结果表明，这些成分具有抗菌、消炎、抗病毒、降血压、降血脂、抗心率失常、抗血小板聚集、抗衰老、镇痛等生理活性〔3～11〕。
对十大功劳属植物中生物碱成分测定的文献报道较少。有文献报道用薄层扫描法测定大叶刺黄柏中的Ⅳ、Ⅵ、Ⅶ〔12〕；用薄层光密度法测定4种十大功劳属植物茎中的Ⅳ、Ⅵ、Ⅶ、木兰花碱(magnoflorine)〔13〕；用高效液相色谱法测定十大功劳叶中的Ⅶ〔14〕。作者在用变波长高效液相色谱法测定了小檗属(Berberis)植物根中的生物碱的基础上〔15〕，为了开发利用十大功劳属植物资源，建立了高效液相色谱法测定十大功劳属植物中的Ⅰ～Ⅶ的方法。这7种成分可用203 nm固定波长1次检测，也可用203～346nm变波长2次检测。但后者既使7种待测成分在各自的最大吸收波长处检测，又避免了吸收波长不同的相邻色谱峰的干扰，提高了分析的灵敏度和准确度。本文用变波长高效液相色谱法对我国产的十大功劳属3种植物的根、根皮、根木、茎皮、茎木和10种不同产地的植物根中的Ⅱ、Ⅳ、Ⅵ、Ⅶ进行了定量分析，Ⅰ、Ⅲ、Ⅴ因对照品量少，只做了定性分析。
1 仪器与试药
Waters高效液相色谱仪(510型泵，490E检测器，U6K进样器，Baseline 810色谱工作站)。
对照品：盐酸小檗碱、盐酸巴马亭、盐酸药根碱购于中国药品生物制品检定所；非洲防己胺由中国药品生物制品检定所涂国士研究员赠送；小檗胺购于中国科学院林业土壤研究所，经重结晶纯化；尖刺碱、异汉防己甲素由中国医学科学院药用植物研究所提供(所用对照品经硅胶薄层层析、2种溶剂系统展开为单点；高效液相色谱法测定，主成分的峰高、峰面积均在97%以上)。植物标本由中国科学院植物研究所应俊生研究员鉴定。乙腈为色谱纯，甲醇和磷酸二氢钾为分析纯，去离子水。
2 实验方法及结果
2.1 色谱条件〔15〕
色谱柱：μ-Bondapak phenyl(10μm，3.9mm×300mm，美国Waters公司)；流动相：0.02mol.L-1磷酸二氢钾-乙腈(7∶3)；柱温：室温；流速：1.0mL.min-1；灵敏度：0.08AUFS；检测波长：固定波长用203nm，变波长0.0～10.0min用203nm，10.0min以后用346 nm。7种生物碱对照品的色谱图见图1。
图1 7种生物碱对照品的色谱图(203 nm检测)
Ⅰ.尖刺碱 Ⅱ.小檗胺 Ⅲ.非洲防己胺Ⅳ.药根碱
Ⅴ.异汉防己甲素 Ⅵ.巴马亭 Ⅶ.小檗碱
2.2 回归方程及线性范围
按文献〔15〕，以进样量(μg)为横坐标(X)，峰面积(microvolt-sec)为纵坐标(Y)，求得回归方程见表1。
2.3 样品溶液的制备
精密称取干燥样品粉末0.1g于50mL磨口三角瓶中，加甲醇20mL，称重，浸泡12h，超声提取60min，称重，补足损失的甲醇，摇匀，密闭，静置；取5.0mL上清液于离心管中，密闭，离心(10000r.min-1，10min)；取上清液(2.0mL)作为样品溶液。
表1 4种生物碱定量分析的回归方程和线性范围
成分
回归方程
r
线性范围/μg
Ⅱ
Y=9.017X×104+4.318×105
0.9993(n=7)
0.019～0.296
Ⅳ
Y=4.239X×104-8.228×104
0.9999(n=9)
0.019～0.996
Ⅵ
Y=4.191X×104+1.446×105
0.9998(n=9)
0.020～1.008
Ⅶ
Y=4.209X×104+1.278×105
0.9998(n=9)
0.020～1.010
2.4 精密度试验〔15〕
精密吸取一样品溶液10μL进样，重复测定10次。求得样品中各成分浓度(μg.mL-1)的RSD(%)：小檗胺 0.28，药根碱 0.84，巴马亭 0.75，小檗碱 1.21。
2.5 加样回收率试验
分别精密称取狭叶十大功劳茎的干燥粉末0.05g5份于50mL磨口三角瓶中，按文献〔15〕操作，每份重复测定3次；计算Ⅱ、Ⅳ、Ⅵ、Ⅶ的回收率，分别为97.2%～102.1%、98.9%～100.3%、97.2%～100.1%、99.4%～100.1%，RSD分别为2.0%、0.62%、1.3%、0.30%。
2.6 样品分析〔15〕
精密吸取样品溶液10μL进样，用203～346nm变波长检测，对Ⅱ、Ⅳ、Ⅵ、Ⅶ进行了定量分析，对Ⅰ、Ⅲ定性分析。再精密吸取10μL进样，用203nm固定波长检测，得到各样品的特征图谱，并定性分析成分Ⅴ。对十大功劳属3种植物的根、根皮、根木、茎皮、茎木和10种不同产地的植物根中的7种生物碱的分析结果见表2、3。
3 讨论
3.1 本文建立的方法能在同一个色谱条件下25min
表2 3种十大功劳属(Mahonia)植物不同部位7种生物碱分析结果(%，n=2)
植物名称
部位
Ⅰ
Ⅱ
Ⅲ
Ⅳ
Ⅴ
Ⅵ
Ⅶ
甘平十大功劳 Mahonia eurybracteata Fedde subsp.ganpinensis(H.Leveill)T.S.Ying et Boufford
(四川省中药学校)
根
-
±
+
0.68
+
0.05
0.78
根皮
+
0.01
-
1.66
+
0.14
3.76
根木
+
±
+
0.69
+
0.06
0.84
茎皮
-
±
-
0.34
+
0.05
0.47
茎木
+
±
-
0.53
+
0.08
0.21
狭叶十大功劳 M.fortunei(Lindl.)Fedde
(重庆南川药物种植所)
根
+
0.34
+
1.17
+
0.06
1.27
根皮
+
0.98
+
3.02
+
0.20
3.54
根木
+
0.18
+
0.54
+
±
0.70
茎皮
+
0.29
+
1.47
+
0.19
0.41
茎木
+
0.28
+
0.98
+
0.05
1.36
长苞十大功劳 M.longibracteata Takeda
(四川峨边)
根
+
±
+
0.40
+
0.62
1.73
根皮
+
±
+
1.10
+
1.30
6.94
根木
-
±
+
0.33
+
0.80
0.98
茎皮
-
±
+
0.74
-
0.60
1.24
茎木
-
-
+
0.21
-
0.28
0.45
+：检出该成分 -：未检出该成分 ±：含量＜0.01%
表3 10种十大功劳属(Mahonia)植物根中7种生物碱分析结果(%，n=2)
植物名称
产地
Ⅰ
Ⅱ
Ⅲ
Ⅳ
Ⅴ
Ⅵ
Ⅶ
阔叶十大功劳 Mahonia bealei(Fort.)Carr.
四川峨边
+
±
+
0.44
+
0.78
1.44
重庆奉节
+
0.02
+
0.50
+
0.64
2.07
鼠刺十大功劳 M.bodinieri Gagnep.
重庆金佛山
+
0.10
+
0.81
+
0.09
0.77
重庆药物种植所
+
0.08
+
0.79
+
0.06
1.11
重庆中药研究院
+
±
+
0.41
+
0.05
0.78
湖南新化*
+
±
+
0.16
+
0.53
1.44
川鄂十大功劳M.eurybracteata Fedde subsp.eurybracteata
四川峨眉山
-
±
+
0.45
+
0.14
1.10
四川峨边
-
±
+
0.82
+
0.12
1.22
重庆缙云山
+
±
+
0.35
+
0.02
0.73
甘平十大功劳 M.eurybracteata Fedde subsp.ganpinensis(H.Leveill)T.S.Ying et Boufford
重庆南川
+
0.01
+
1.01
+
0.04
1.58
四川省中药学校
-
±
+
0.68
+
0.05
0.78
狭叶十大功劳 M.fortunei(Lindl.)Fedde
重庆药物种植所
+
0.34
+
1.17
+
0.06
1.27
四川峨眉山
+
±
+
0.82
+
0.06
1.42
湖南新化*
+
0.19
+
0.88
+
0.07
0.59
细梗十大功劳 M.gracilipes(Oliv.)Fedde
四川峨眉山
-
±
+
0.67
+
0.15
0.99
长苞十大功劳M.longibracteata Takeda
四川峨边
+
±
+
0.40
+
0.62
1.73
岩紫黄 M.nitens Schneid.
四川峨眉山
-
0.02
+
1.05
+
0.17
0.55
多齿十大功劳 M.polyodota Fedde
四川峨眉山
-
0.02
+
0.67
+
0.10
0.52
重庆金佛山
-
0.01
+
0.22
+
0.13
0.30
M.sp.(未定种名)
重庆金佛山
-
0.01
+
0.28
+
1.38
1.30
+：检出该成分 -：未检出该成分 ±：含量＜0.01% *：测定部位是茎
内测定十大功劳属植物不同部位以及不同产地植物中的Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ 3种双苄基异喹啉类和Ⅲ、Ⅳ、Ⅵ、Ⅶ 4种原小檗碱类生物碱。方法的重现性好、精密度高、适用范围广。
3.2 十大功劳属与小檗属植物亲缘关系相近，化学成分相似。研究结果表明：能用相同或相近的HPLC色谱条件测定这两属植物中相同的生物碱成分。
3.3 在所测定的10种植物中，Ⅲ的峰很低，参照Ⅳ、Ⅵ、Ⅶ的分子结构和峰面积，推测Ⅲ的含量低于0.01%。Ⅰ和Ⅱ除狭叶十大功劳外，在其余植物中的峰较弱，含量较低；Ⅴ的峰在大多数植物中很强，含量高(本实验中因对照品量少，未定量)。
3.4 这7种成分在该属植物不同部位中的分布、含量有一定差别，其差异程度随植物种类不同而异。含量基本上以根皮中最高，茎皮中次之，然后是根木部、茎木部。以往多以茎入药〔1〕，但从分析结果看，其根也是不可忽视的资源。
作者单位：吕光华 华西医科大学药学院 成都610044
王立为 陈立民 肖培根 中国协和医科大学、中国医学科学院药用植物研究所北京100094
参考文献
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15 吕光华，陈建民，肖培根.改变检测波长HPLC法测定小檗属植物中的生物碱.药学学报，1995，30(4)：280
